우리는 지난주에 셀룰로오스 아세테이트 막 전기영동 사용에 대한 몇 가지 고려 사항을 공유했으며, 참고를 위해 오늘 여기서 이 주제를 마무리하겠습니다.
의 선정 완충 농도
셀룰로오스 아세테이트 막 전기영동에 사용되는 완충액 농도는 일반적으로 종이 전기영동에 사용되는 것보다 낮습니다.일반적으로 사용되는 pH 8.6B임의 완충액은 일반적으로 0.05 mol/L ~ 0.09 mol/L 범위 내에서 선택됩니다.농도를 선택할 때 예비 결정이 이루어집니다.예를 들어, 전기영동 챔버의 전극 사이의 멤브레인 스트립 길이가 8-10cm인 경우 멤브레인 길이 1cm당 25V의 전압이 필요하며 전류 강도는 멤브레인 폭 1cm당 0.4-0.5mA여야 합니다.전기영동 중에 이러한 값이 달성되지 않거나 초과되는 경우 완충액 농도를 높이거나 희석해야 합니다.
버퍼 농도가 지나치게 낮으면 밴드가 빠르게 이동하고 밴드 폭이 증가합니다.반면, 버퍼 농도가 지나치게 높으면 밴드 이동이 느려져 특정 분리 밴드를 구별하기가 어려워집니다.
셀룰로오스 아세테이트 막 전기영동에서는 전류의 상당 부분이 샘플을 통해 전도되어 상당한 양의 열이 발생한다는 점에 유의해야 합니다.때로는 선택한 완충액 농도가 적절하다고 간주될 수도 있습니다.그러나 환경 온도가 높아지거나 더 높은 전압을 사용하는 경우 열로 인한 물의 증발이 강화되어 버퍼 농도가 과도하게 높아지고 심지어 멤브레인이 건조해지는 원인이 될 수 있습니다.
샘플량
셀룰로오스 아세테이트 막 전기영동에서 시료량은 전기영동 조건, 시료 자체의 특성, 염색 방법, 검출 기술 등 다양한 요인에 따라 결정됩니다.일반적으로 검출 방법의 감도가 높을수록 샘플의 양이 적어지기 때문에 분리에 유리합니다.시료량이 과도할 경우 전기영동 분리 패턴이 명확하지 않을 수 있으며 염색에도 시간이 많이 걸릴 수 있습니다.그러나 용출 비색 검출 방법을 사용하여 분리된 염색된 밴드를 정량적으로 분석할 때 샘플 부피가 너무 작아서는 안 됩니다. 특정 성분에 대한 흡광도 값이 낮아지고 함량 계산 시 오류가 높아질 수 있기 때문입니다.이러한 경우 검체량을 적절하게 늘려야 합니다.
일반적으로 샘플 적용 라인의 1cm당 추가되는 샘플 용량은 0.1~5μL이며 이는 5~1000μg의 샘플량에 해당합니다.예를 들어, 일상적인 혈청 단백질 전기영동 분석에서 애플리케이션 라인의 각 센티미터에 추가되는 샘플 용량은 일반적으로 단백질 60~80μg에 해당하는 1μL를 초과하지 않습니다.그러나 동일한 전기영동 방법을 사용하여 지질단백질이나 당단백질을 분석하는 경우 그에 따라 시료량을 늘려야 합니다.
결론적으로, 일련의 사전 실험을 통해 특정 조건에 따라 가장 적합한 시료량을 선택해야 합니다.
염색 용액 선택
셀룰로오스 아세테이트 막 전기영동에서 분리된 밴드는 일반적으로 검출 전에 염색됩니다.다양한 시료 구성 요소에는 다양한 염색 방법이 필요하며, 셀룰로오스 아세테이트 막 전기영동에 적합한 염색 방법은 여과지에 완전히 적용되지 않을 수 있습니다.
염색 용액을 선택하는 데에는 세 가지 주요 원칙이 있습니다.셀룰로오스 아세테이트 막.첫째로,수용성 염료는 알코올 용해성 염료보다 선호되어야 후자의 염색 용액으로 인한 막 수축 및 변형을 방지할 수 있습니다.염색 후에는 막을 물로 헹구고 염색 기간을 최소화하는 것이 중요합니다.그렇지 않으면 멤브레인이 말리거나 수축되어 후속 감지에 영향을 미칠 수 있습니다.
둘째, 시료에 대한 염색 친화력이 강한 염료를 선택하는 것이 바람직하다.혈청 단백질의 셀룰로오스 아세테이트 막 전기영동에서는 다양한 혈청 단백질 성분에 대한 강한 염색 친화성과 안정성 때문에 아미노 블랙 10B가 일반적으로 사용됩니다.
셋째, 믿을 수 있는 품질의 염료를 선택해야 한다.일부 염료에는 동일한 이름이 있음에도 불구하고 염색 후 배경이 특히 어두워지는 불순물이 포함되어 있을 수 있습니다.이로 인해 원래 잘 분리된 밴드가 흐려져 구별하기 어려워질 수도 있습니다.
마지막으로 염색액 농도의 선택이 중요합니다.이론적으로 염색 용액 농도가 높을수록 샘플 구성 요소가 더 철저하게 염색되고 염색 결과가 더 좋아지는 것처럼 보일 수 있습니다.그러나 이는 사실이 아니다.시료 성분과 염료 사이의 결합 친화력은 일정한 한계가 있으며, 이는 염색 용액 농도가 증가해도 증가하지 않습니다.반대로, 염색액 농도가 지나치게 높으면 염료가 낭비될 뿐만 아니라 선명한 배경을 얻기 어렵게 됩니다.또한 색상 강도가 특정 최대 값에 도달하면 염료의 흡광도 곡선은 특히 정량적 측정에서 선형 관계를 따르지 않습니다. 셀룰로오스 아세테이트 막 전기 영동에서 염색 용액 농도는 일반적으로 종이 전기 영동에 사용되는 농도보다 낮습니다.
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엘Cellulose Acetate Membrane을 이용한 혈청 단백질 분리 실험
엘셀룰로오스 아세테이트 막 전기영동을 사용할 때 몇 가지 고려 사항을 염두에 두어야 합니다(1)
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참조:Mr. Li의 전기영동(제2판)
게시 시간: 2023년 6월 6일