원칙
셀룰로오스아세테이트 필름 전기영동은 셀룰로오스아세테이트 필름을 지지체로 사용하는 전기영동법이다. 전기장의 작용으로 하전입자가 반대전극을 향해 이동하는 현상을 전기영동이라 한다. 각 단백질은 특정한 등전점을 갖고 있으므로 등전점보다 pH가 낮은 용액에 단백질을 넣으면 단백질은 양전하를 띠고 음극 쪽으로 이동합니다. 반대로 양극으로 이동합니다. 전기장에서 이동하는 단백질 분자의 속도는 전하, 분자의 모양 및 크기와 관련되어 있으므로 전기영동을 통해 서로 다른 단백질을 분리할 수 있습니다. 혈청에는 다양한 단백질이 포함되어 있으며, 모두 pH7.5 이하의 등전점을 갖습니다. 전기영동을 실행하기 위해 혈청을 pH 8.6 완충액에 넣으면 모든 혈청 단백질은 음전하를 띠고 전기장에서 양전하 쪽으로 이동합니다. 다양한 혈청 단백질은 동일한 pH에서 서로 다른 전하를 가지므로 분자 입자의 크기가 다르므로 이동 속도가 다르며 전기 영동으로 분리됩니다. 혈청 단백질의 등전점과 분자량은 아래 표에 나와 있습니다.
| 단백질 | 등전점(PI) | 분자량 |
| 알부민 | 4.88 | 69,000 |
| α1-글로린 | 5.00 | 200,000 |
| α2-글로린 | 5.06 | 300,000 |
| β-글로린 | 5.12 | 9 000~150 000 |
| γ-글로린 | 6.85~7.50 | 156,000~300,000 |
실험은 셀룰로오스 아세테이트 멤브레인(약어: CAM)을 지지 매체로 사용하여 혈청 내 다양한 단백질을 분리하는 것입니다. CAM은 일종의 발포 화장실이다.e필름은 균일하고 두께가 0.1mm-1.5mm로 일정한 수분 흡수성을 가지고 있습니다.
CAM 전기영동용 재료, 기기 및 시약
샘플:건강한 인간 혈청
기구:전원 공급 장치 DYY-6C, 전기 영동 탱크 DYCP-38C, 우수한 샘플 로딩 WD-9404
시약
1) 셀룰로오스 아세테이트 멤브레인 7X9cm
2) PH 8.6 바르비톨완충용액(이온강도 0.05~0.09, 0.06tid 시간) : 디에틸바르비투르산 1.84g을 취한 후 펜토바르비탈디에틸나트륨 1.03g을 취하고 약간의 증류수를 가하여 가온하여 녹인다. 최대 1000ml;
3) 얼룩: 폰소S 0.2g, 삼염화아세트산 3g, 증류수 100ml 첨가;
4) TBS/T 또는 PBS/T: 95% 에탄올 45ml, 빙초산 5ml, 증류수 50ml 첨가;
5) 세척액: 무수에탄올 70ml, 빙초산 30ml.
실험방법d
1) 멤브레인 준비 : 멤브레인을 바르비톨 완충용액에 30분~8시간 담가둔 후 꺼내어 흡수지로 여분의 용액을 제거합니다.
2) 시료 로딩 : 멤브레인의 거친 면과 매끈한 면을 구분하고, 거친 면 상단에서 1.5cm 거리에 선을 그어줍니다. 거친 면에 우수한 샘플 로딩 도구를 사용하여 샘플을 로드합니다. 참고: 샘플은 멤브레인의 거친 면에 로드해야 합니다. 혈청 샘플이 멤브레인에 완전히 침투한 후 멤브레인을 뒤집어 거친 면(샘플이 있는 부분)이 탱크를 향하도록 놓고 샘플이 있는 끝 부분을 음극에 놓습니다.
3) 전기영동: 전원을 켠다, 0.4～0.6m A/cm 막, 작동 시간은 30-45분입니다. 전기영동을 실행한 후 전원을 꺼주세요.
4) 얼룩 및 청소: 탱크에서 멤브레인을 꺼내어 담그십시오.it 염료 용액에 5분간 담가둔 후, 배경색이 투명해질 때까지 세척액에 3~4회 반복하여 닦아냅니다. 혈청 단백질은 밴드에 표시되어야 하며 일반적으로 표시된 선의 상단을 형성하는 알부민, α1-글로린, α2-글로린, β-글로린, γ-글로린의 5개 영역으로 구성됩니다.
5) 보존방법 : 건식전기영동을 넣어둔다밴드세척액에 10~15분 담가둔 후 꺼내어 깨끗한 유리 위에 붙이고 건조되면 투명 필름으로 변합니다.밴드.
실험결과
혈청 시료의 분리 효과가 좋고, 밴드 테일링 현상이 없습니다. 결과의 반복성은 실험자의 테스트 절차와 방법에 따라 달라지며, 반복성이 높습니다.
결론
신속한 임상 전기영동 검출 시스템(전기영동조DYCP-38C,전원 공급 장치DYY-6C 및 우수한 샘플 로딩 WD-9404) 당사에서 생산회사명 베이징류이생물공학유한회사실험 요구 사항을 충족하고,그리고결과는 재현 가능하고 간단하며 빠르며 다음에 적합합니다.가르침연구.
베이징 류이(주)바이오테크놀로지는 생명과학 산업을 위한 전기영동 제품을 전문적으로 생산하는 회사입니다.중국에서 50년 이상의 역사를 가지고 있으며 전 세계에 안정적이고 고품질의 제품을 제공할 수 있습니다. 수년간의 개발을 통해 귀하가 선택할 가치가 있습니다!
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게시 시간: 2022년 11월 14일