DNA 겔 전기영동은 크기에 따라 DNA 단편을 분리하고 분석하는 데 사용되는 일반적인 분자 생물학 기술입니다. 이 과정에는 홍조류에서 발견되는 탄수화물인 아가로스로 만든 젤에 다양한 크기의 DNA 조각을 넣는 작업이 포함됩니다.
아가로즈 젤 준비 및 캐스팅
- 아가로스를 적당량의 전기영동 완충액에 녹입니다. 겔의 농도는 질량 대 부피 비율(예: 100분의 1g 아가로스)에 의해 결정됩니다.ml 1% 겔용 완충액.
- 혼합물을 전자레인지에서 가열하고 용기를 회전시켜 아가로스가 완전히 용해되도록 합니다.
- 에티듐 브로마이드를 젤 용액에 최종 농도 0.5로 추가합니다.mg/ ml. 에티디움 브로마이드(Ethidium bromide)는 인접한 DNA 염기쌍 사이에 삽입되어 UV 광선 아래에서 주황색 형광을 방출합니다. 에티듐 브로마이드는 발암물질이므로 취급 시 장갑을 착용하는 등 적절한 안전 조치가 필요합니다.
- 고온으로 인해 젤 트레이가 휘어지는 것을 방지하기 위해 젤 용액을 수조에서 식힙니다.
- 빗을 겔 용액에 넣어 샘플 웰을 형성합니다. 로딩할 DNA 샘플의 양에 적합한 빗을 선택하세요. 아가로스 겔 용액을 용기에 붓습니다.젤 트레이그리고 실온에서 굳혀주세요.
- 젤이 굳으면 빗을 제거하세요. 젤을 즉시 사용하지 않을 경우에는 비닐랩에 싸서 필요할 때까지 4℃에 보관하세요.
젤 준비 및 실행
전기영동을 시작하기 전에 DNA 샘플을 로딩 버퍼와 혼합합니다. 로딩 버퍼는 일반적으로 6배 더 농축되어 있으며 샘플이 웰 바닥으로 가라앉고 전기 영동 중에 움직임을 추적하는 데 도움이 됩니다.
전원 공급 장치를 지정된 전압으로 설정하십시오.
겔 표면을 덮을 만큼 충분한 전기영동 완충액을 겔 탱크에 추가합니다.보장하다올바른 전극 연결.
DNA 샘플과 분자량 마커를 젤 웰에 넣습니다.
전기 영동을 시작하려면 전원 공급 장치를 켜십시오.
분리된 DNA 단편 관찰
전기영동이 끝나면 전원을 끄고 젤을 제거하세요.
UV 광원을 사용하여 젤을 조명합니다. DNA 조각은 주황색 형광 밴드로 나타납니다.
분리된 DNA 단편을 분석하기 위해 젤 이미지를 문서화합니다.
실험 후에는 실험실 지침에 따라 젤과 전기영동 완충액을 적절하게 폐기하십시오. 이 위험 물질에 대한 노출을 방지하기 위해 에티듐 브로마이드가 포함된 젤과 완충액을 취급할 때는 항상 장갑을 착용하십시오.
DNA 겔 전기영동은 DNA 분자 크기 추정, DNA 단편 분리, 유전자 돌연변이 검출, DNA 지문 채취 등을 위한 분자 생물학 및 유전학 연구에 널리 사용됩니다. DNA 시료의 구성과 특성을 이해하는 데 도움이 되는 간단하고 효과적인 실험 기법입니다.
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게시 시간: 2023년 8월 8일