샘플 준비 및로드 중
대부분의 경우 stacking gel이 없는 연속 완충 시스템을 사용하기 때문에 시료는 적절한 농도와 적은 양을 가져야 합니다. 사용피펫분해능이 크게 감소하는 것을 방지하기 위해 웰당 5~10μg의 샘플을 천천히 추가합니다. 언제샘플 로딩, 전원 공급 장치를 꺼야 합니다. 샘플에는 밀도를 높이고 샘플을 농축하며 확산을 방지하기 위해 지시약 염료(0.025% 브로모페놀 블루 또는 오렌지)와 자당(10-15%) 또는 글리세롤(5-10%)이 포함되어야 합니다. 그러나 때때로 수크로스나 글리세롤은 전기영동 결과에서 U자형 밴드를 유발할 수 있는데, 이는 2.5% Ficoll(폴리비닐피롤리돈)을 사용하면 피할 수 있습니다.
전기영동
전기영동 전압은 5~15V/cm, 일반적으로 약 10V/cm입니다. 큰 분자를 분리하려면 전압이 더 낮아야 하며 일반적으로 5V/cm를 초과하지 않아야 합니다.
더럽히는 것
형광 염료 에티디움 브로마이드(EB)는 아가로스 겔에서 DNA 밴드를 관찰하기 위한 염색에 일반적으로 사용됩니다. EB는 DNA 분자의 염기쌍 사이에 삽입되어 EB가 DNA와 결합하도록 할 수 있습니다. DNA에 의한 260nm 자외선의 흡수는 EB로 전달되고, 결합된 EB는 가시광선 스펙트럼의 붉은색-주황색 영역의 590nm에서 형광을 방출합니다. 1mmol/L MgSO4 용액에서 1시간 동안 겔을 염색하면 결합되지 않은 EB로 인한 배경 형광을 감소시켜 소량의 DNA 검출을 용이하게 할 수 있습니다.
EB 염료에는 여러 가지 장점이 있습니다. 사용하기 쉽고, 핵산을 파괴하지 않으며, 감도가 높으며, DNA와 RNA를 모두 염색할 수 있습니다. EB는 샘플에 추가할 수 있으며 언제든지 UV 흡수를 사용하여 추적할 수 있습니다. 염색 후, n-부탄올로 추출하여 EB를 제거할 수 있습니다.
그러나 EB 염료는 강력한 돌연변이 유발 물질이므로 취급 시 폴리에틸렌 장갑을 착용하는 등의 예방 조치를 취해야 합니다. 아크리딘 오렌지는 단일 가닥 핵산과 이중 가닥 핵산(DNA, RNA)을 구별할 수 있기 때문에 일반적으로 사용되는 염료이기도 합니다. 이중 가닥 핵산의 경우 녹색 형광(530 nm)을 나타내고 단일 가닥 핵산의 경우 빨간색 형광(640 nm)을 나타냅니다. 또한 메틸렌 블루, 메틸렌 그린, 퀴놀린 B와 같은 다른 염료를 염색에 사용할 수 있습니다.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd(Liuyi Biotechnology)는 자체 전문 기술팀과 R&D 센터를 통해 50년 이상 전기영동 기기 제조를 전문으로 해왔습니다. 우리는 설계부터 검사, 창고, 마케팅 지원까지 신뢰할 수 있고 완벽한 생산 라인을 보유하고 있습니다. 당사의 주요 제품은 전기영동 셀(탱크/챔버), 전기영동 전원 공급 장치, 청색 LED 투과조명기, UV 투과조명기, 젤 이미지 및 분석 시스템 등입니다.
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게시 시간: 2023년 12월 20일