Agarose Gel 전기영동의 기본 기술(1)

1. 분류

겔 전기영동은 수직형(column gel, slab gel 포함)과 수평형(주로 slab gel)으로 구분된다(그림 6-18). 일반적으로 수직 분리는 수평보다 약간 우수하지만 수평 겔 준비에는 최소한 4가지 장점이 있습니다. 전체 겔 아래에 지지대가 있어 저농도 아가로스를 사용할 수 있습니다. 다양한 사양의 아가로스 겔 플레이트를 준비하는 것이 가능합니다. 젤 준비 및 샘플 로딩이 더 편리합니다. 전기영동 챔버는 구성이 쉽고 비용 효율적입니다. 수평 전기영동은 전기영동 완충액 표면에서 약 1mm 정도 아래에 아가로스 겔 플레이트를 완전히 담근 상태에서 수행되므로 침지형 전기영동이라고도 합니다.

아가로스겔 전기영동용 전기영동 탱크 DYCP-31DN

2.버퍼 시스템

핵산 분리에서 대부분의 시스템은 연속 시스템을 채택합니다. 일반적으로 사용되는 전기영동 완충액에는 TBE(0.08mol/L Tris·HCl, pH 8.5, 0.08mol/L boric acid, 0.0024mol/L EDTA) 완충액과 THE(0.04mol/L Tris·HCl, pH 7.8, 0.02mol/L) 완충액이 있습니다. 아세트산 나트륨, 0.0018mol/L EDTA) 완충액. 이러한 완충액은 일반적으로 10x 스톡 솔루션으로 준비되고 사용 시 필요한 농도로 희석됩니다. 아가로스 젤에서 선형 및 원형 DNA의 이동 속도는 사용된 완충액에 따라 다릅니다. THE 완충액에서는 선형 DNA의 이동 속도가 원형 DNA의 이동 속도보다 빠른 반면, TBE 완충액에서는 그 반대입니다.

3.아가로스 젤의 준비

(1) 수평형 아가로스 겔의 제조

(a) 1x 전기영동 완충액을 사용하여 필요한 농도의 아가로스 겔을 준비합니다.

(b) 끓는 수조, 자석 교반기 또는 전자레인지에서 아가로스를 가열하여 용해를 완료합니다. 아가로스 용액을 55°C로 냉각하고 에티듐 브로마이드(EB) 염료를 최종 농도 0.5 μg/ml로 추가합니다.

(c) 유리판이나 아크릴판의 가장자리를 소량의 아가로스 겔로 밀봉하고 빗을 추가한 후 빗살을 판 위 약 0.5~1.0mm 위치에 놓습니다.

(d) 녹은 아가로스 겔 용액을 유리 또는 아크릴 플레이트 몰드에 지속적으로 붓고(두께는 DNA 샘플의 부피에 따라 다름) 기포가 유입되지 않도록 합니다. 실온에서 자연적으로 굳혀주세요.

(e) 완전히 응고된 후 빗을 조심스럽게 제거합니다. 겔 탱크에 전기영동 완충액을 적당량 첨가하고, 겔 플레이트가 전기영동 완충액 표면 아래 약 1mm 정도 잠기도록 합니다.

(2) 수직형 아가로스 겔의 제조

(a) 에탄올로 세척하여 유리판의 그리스나 잔여물을 제거합니다.

(b) 전면 댐과 후면 댐 사이에 스페이서 플레이트를 놓고 스페이서 플레이트의 가장자리를 전면 및 후면 댐에 맞춘 다음 클램프로 고정합니다.

(c) 스페이서 플레이트의 가장자리 사이에 1x 버퍼에 2% 아가로즈를 추가하여 젤 캐스팅 챔버 바닥에 1cm 높이의 아가로즈 플러그를 형성합니다.

(d) 녹은 아가로즈 젤을 1x 완충액으로 제조한 원하는 농도로 상단 아래 최대 1cm까지 젤 챔버에 붓습니다.

(e) 빗살 아래에 기포가 갇히지 않도록 하면서 빗을 삽입합니다. 때로는 아가로스 젤 냉각 중에 빗살에 주름이 나타날 수 있습니다. 이러한 경우에는 녹인 아가로스를 상단에 추가하여 굳혀주세요.

(f) 빗을 제거합니다. 로딩 슬롯에서 버퍼 누출을 방지하려면 아가로즈 겔 플레이트와 전기 영동 챔버 사이의 연결을 2% 아가로즈로 밀봉하고 필요한 양의 버퍼를 추가합니다.

(g) 겔 챔버에 1x 전기영동 완충액을 추가합니다.

(h) DNA 샘플을 완충액 아래의 아가로스 젤에 조심스럽게 로드합니다.

아가로스 겔 전기영동에 대한 기본 지식에 대한 자세한 내용은 다음 주에 공유하겠습니다. 이 정보가 귀하의 실험에 도움이 되기를 바랍니다.

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